Immunomie-geleide antigeendetectie voor door praziquantel geïnduceerde vaccinatie bij urogenitale menselijke schistosomiasis
Ondanks de enorme morbiditeit die aan schistosomiasis wordt toegeschreven, is er voor de honderden miljoenen geïnfecteerde mensen nog steeds geen vaccin om de ziekte te bestrijden . Het anthelminticum, praziquantel, is de belangrijkste behandelingsoptie, hoewel het moleculaire werkingsmechanisme slecht gedefinieerd blijft. Behandeling met praziquantel beschadigt het buitenste oppervlak van de parasiet, het huidvlies, waardoor oppervlakte-antigenen worden vrijgemaakt van stervende wormen die een krachtige immuunrespons oproepen die bij sommige personen resulteert in immunologische resistentie tegen herinfectie. Hierin noemen we dit fenomeenGeneesmiddelgeïnduceerde vaccinatie (DIV). Om de antigene doelen van DIV-antilichamen in urogenitale schistosomiasis te identificeren, hebben we een recombinante proteoomarray geconstrueerd die bestaat uit ongeveer 1.000 eiwitten die zijn geïnformeerd door verschillende secretome-datasets, waaronder gevalideerde proteomen en bio-informatische voorspellingen.
Arrays werden gescreend met sera van menselijke proefpersonen die werden behandeld met praziquantel en 18 maanden later werd aangetoond dat ze ofwel opnieuw waren geïnfecteerd (chronisch geïnfecteerde proefpersonen, CI) of resistent waren tegen herinfectie (DIV). IgG-responsen op talrijke antigenen waren vital verhoogd bij DIV in vergelijking met CI-patiënten, en inderdaad waren IgG-responsen op sommige antigenen volledig ondetecteerbaar bij CI-patiënten, maar werden ze krachtig herkend door DIV- patiënten. Eén antigeen in het bijzonder , een cystatine-cysteïne-proteaseremmer, viel op als een uniek doelwit van DIV IgG, dus werd recombinant cystatine geproduceerd en de werkzaamheid van het vaccin werd beoordeeld in een heteroloog Schistosoma mansoni muis uitdaging mannequin. Hoewel er geen vital impact was van vaccinatie met cystatine met adjuvans op het aantal volwassen wormen, werden zeer significante verlagingen van de belasting van levereieren (45-55%, P < 0,0001) en darmeieren (50-54%, P < 0,0003) bereikt in muizen gevaccineerd met cystatine in twee onafhankelijke onderzoeken. Deze studie heeft talloze antigenen onthuld die doelwitten zijn van DIV- antilichamen bij urogenitale schistosomiasis en veelbelovend zijn als subeenheidvaccindoelen voor een geneesmiddelgebonden vaccinatiebenadering voor het beheersen van schistosomiasis.
Immunotherapie met behulp van IgE of auto-T-cellen voor kanker die het tumor antigen SLC3A2
Achtergrond: Kankerimmunotherapie met monoklonale antilichamen en chimere antigeenreceptor (CAR) T-celtherapieën kunnen baat hebben bij de selectie van nieuwe doelwitten met een hoge tumorspecificiteit en bij vroege beoordelingen van werkzaamheid en veiligheid om potentiële therapieën te verminderen.
Methoden: Met behulp van massaspectrometrie, bio-informatica, immuno-massaspectrometrie en CRISPR/Cas9 identificeerden we het doelwit van het tumorspecifieke SF-25-antilichaam. We ontwikkelden IgE- en CAR T-cel-immunotherapieën afgeleid van de SF-25-kloon en evalueerden het potentieel voor kankertherapie.
Resultaten: We identificeerden het doelwit van de SF-25-kloon als het tumor-geassocieerde antigeen SLC3A2, een celoppervlakte-eiwit met sleutelrollen in het kankermetabolisme. We genereerden IgE monoklonaal antilichaam en CAR T-cel-immunotherapieën die elk SLC3A2 herkennen. In overeenstemming met preklinische en, meer recentelijk, klinische bevindingen met het eerste-in-klasse IgE-antilichaam MOv18 (dat het tumor-geassocieerde antigeen Folaatreceptor alfa herkent), versterkte SF-25 IgE Fc-gemedieerde effectorfuncties tegen kankercellen in vitro en beperkt groei van menselijke tumorxenotransplantaten bij muizen die zijn geënt met menselijke effectorcellen. Het antilichaam veroorzaakte ex vivo geen basofielactivering in het bloed van kankerpatiënten, wat suggereert dat het niet tot overgevoeligheid van sort I kan leiden en een veilige therapeutische toediening ondersteunt. SLC3A2-specifieke CAR T-cellen vertoonden cytotoxiciteit tegen tumorcellen, gestimuleerde productie van interferon-γ en interleukine-2 in vitro. In vivo SLC3A2-specifieke CAR T-cellen verhoogden vital de algehele overleving en verminderde groei van subcutane PC3-LN3-luciferase-xenotransplantaten. Er werden geen gewichtsverlies, manifestaties van cytokine-release-syndroom of graft-versus-host-ziekte gedetecteerd.
Conclusies: Deze bevindingen identificeren een effectieve en potentieel veilige tumortargeting van SLC3A2 met nieuwe immuunactiverende antistoffen en genetisch gemodificeerde celtherapieën.
Carcino-embryonaal antigeen als een ligand specifiek glycoproteïne van rBC2LCN lectine op pancreatische ductale adenocarcinoom cellen
Van het rBC2LCN-lectine, bekend als een stamcelmarkerprobe die bindt aan een H-type three gefucosyleerd trisaccharidemotief, werd onlangs onthuld dat het ook bindt aan pancreas ductaal adenocarcinoom (PDAC) cellen. Een lectine-geneesmiddelconjugaat werd gegenereerd door rBC2LCN te fuseren met een cytocidaal toxine, en het vertoonde een sterk antikankereffect in in vitro en in vivo PDAC-modellen. Het is echter onduidelijk welke moleculen dragereiwitten zijn van rBC2LCN op PDAC-cellen. In deze studie hebben we een rBC2LCN-positief glycoproteïne geïdentificeerd dat tot expressie wordt gebracht in PDAC. Tumorlysaten van PDAC-patiënt-afgeleide xenotransplantaten (PDX’s) werden gecoprecipiteerd met rBC2LCN-lectine en geanalyseerd met LC-MS/MS. Een totaal van 343 eiwitten werden aanvankelijk geïdentificeerd. We gebruikten een webgebaseerde database om 5 glycoproteïnen te selecteren en evalueerden onafhankelijk hun expressie in PDAC door immunohistochemie (IHC).
Onder hen hebben we ons gericht op carcino-embryonaal antigeen 5 (CEA) als het meest kankerspecifieke dragereiwit in PDAC, omdat het het meest prominente verschil in expressiesnelheid liet zien tussen PDAC-cellen (74%) en normale pancreaskanaalcellen (0%, p> 0,0001). rBC2LCN-lectine en CEA-colokalisatie in PDAC-monsters werd bevestigd door analyse met dubbele kleuring. Verder werden rBC2LCN-geprecipiteerde fracties geblot met een anti-CEA polyklonaal antilichaam (pAb), en CEA pAb-geprecipiteerde fracties werden geblot met rBC2LCN-lectine. De resultaten tonen aan dat CEA in feite een ligand is van rBC2LCN-lectine.
Stabiele epigenetische programmering van effector en centrale geheugen CD4 T-cellen vindt plaats binnen 7 dagen na blootstelling aan antigeen in vivo
vivo veranderingen in genregulerende netwerken die verantwoordelijk zijn voor hun vermogen om efficiënter te reageren op secundaire infecties. Om de timing en aard van immunologisch geheugen te ontcijferen, hebben we genoombrede analyses uitgevoerd van epigenetische en transcriptionele veranderingen in een muismodel dat antigeenspecifieke T-cellen genereert. Epigenetische herprogrammering voor Th-differentiatie en geheugen T-celvorming was al vastgesteld door de piek van de T-celrespons na 7 dagen. Het Th-geheugen T- celprogramma ging gepaard met een toename van open chromatineregio’s, verrijkt met RUNX- , ETS- en T-bet-motieven, die 56 dagen stabiel bleven.
De epigenetische programma’s voor zowel effectorgeheugen, geassocieerd met T-bet, als centraal geheugen, geassocieerd met TCF-1, werden parallel opgesteld. Geheugen T-cel-specifieke regulerende elementen waren geassocieerd met sterk verbeterde induceerbare Th1-vooringenomen reacties tijdens secundaire blootstelling aan antigeen. Bovendien geheugen-T-cellen reageerden in vivo om opnieuw blootstelling aan antigen door snel reprograming de gehele ETS factorgen regelgevingsnetwerk, door het onderdrukken Ets1 en activeren ETV6 expressie. Deze gegevens tonen aan dat genregulerende netwerken epigenetisch worden geherprogrammeerd naar het geheugen tijdens infectie en substantiële veranderingen ondergaan bij herstimulatie.
Functionele analyse van kolonisatie issue antigeen ik positief enterotoxigene Escherichia coli identificeert genen die betrokken zijn bij de overleving in water en gastheer kolonisatie
Enterotoxigene Escherichia coli (ETEC) die de kolonisatiepil CFA/I tot expressie brengt, zijn veelvoorkomende oorzaken van diarree-infecties bij mensen. Hier gebruiken we een combinatie van transposon-mutagenese en transcriptomische analyse om genen en routes te identificeren die bijdragen aan ETEC-persistentie in wateromgevingen en kolonisatie van een zoogdiergastheer. ETEC die in water aanhoudt, vertoont een duidelijk RNA-expressieprofiel van die welke in rijkere media groeien.
Er werden meerdere routes geïdentificeerd die bijdragen aan de overleving van water, waaronder de biosynthese van lipopolysacchariden en stressresponsregulonen. De analyse gaf ook aan dat ETEC- groei in vivo bij muizen een knelpunt tegenkomt dat de diversiteit van koloniserende ETEC- populaties vermindert.